При поддержке минздрава Израиля

Профилирование экспрессии белка в циркулирующих опухолевых клетках методом микрофлюидного вестерн-блоттинга

Ученые из США разработали новый метод анализа поверхностных и внутренних пептидов. В отличие от своего предшественника, для полноценной работы ему достаточно двух клеток.

Циркулирующие опухолевые клетки — очень редкие структуры, встречающиеся в кровеносной системе некоторых больных раком. Они просачиваются в кровоток из опухоли при появлении 1–500 клеток на 7,5 мл крови. Их клиническое и функциональное значение все еще изучается, но уже известно, что высокий уровень этих элементов связан с плохой выживаемостью пациентов и низкой реактивностью на лечение. Кроме того, они могут влиять на метастазирование. По мнению ученых, профилирование белков будет дополнять последние данные об их транскрипционных и геномных свойствах.

Современные исследователи испытывают трудности с анализом белка в рамках одной клетки. Большинство методов представляет собой одностадийные иммунологические анализы, в том числе — фермент-связанные иммуносорбентные анализы, цитохимию, массовую цитометрию. Несмотря на то, что эти методики, в первую очередь, фокусируются на поверхностных и секретируемых пептидах, они не способны обнаружить терапевтические мишени.

В течение нескольких десятилетий ученые пытались анализировать белки, разделяя их методом электрофореза в полиакриламидном геле. Это двухэтапный анализ, так называемый вестерн-блоттинг. Существенный недостаток — для его проведения нужно не менее 1000 клеток. В данной работе исследователи из Соединенных Штатов оптимизировали методику, что дало им возможность анализировать одиночные клетки. В серии экспериментальных работ ученые продемонстрировали, что для профилирования белков методом так называемого микрофлюидного вестерн-блоттинга достаточно двух клеточных элементов, причем он дает информацию не только о поверхностных, но и о внутренних молекулах.
По мнению исследователей, новый способ анализа откроет широкие диагностические и лечебные возможности, в частности поможет разработать персонализированную терапию злокачественных заболеваний и проконтролировать ее эффективность.

 

Наверх